ریل تایم پی سی آر (Real-Time PCR)

دستگاه real-time PCR (ریل تایم پی سی آر) به جهت بررسی میزان بیان ژن های موجودات زنده  است. محدودیتی که سیستم PCR ساده بوجود آورده است عدم توانایی بررسی کمی میزان بیان یک ژن می باشد.  ریل تایم پی سی آر (Real-time PCR) جهت بررسی بیان یک ژن، ابتدا با کمک آنزیم  (آنزیم MMLV)  مولکول های RNA را سنتز و به DNA های مکمل که غالبا cDNA نامیده می شوند  تبدیل می کنند.

پس از پایداری مولکول مورد سنجش، وارد سیکل های ریل تایم پی سی آر (Real-time PCR) شده و بیان ژن مورد مطالعه قرار می گیرد. همانطور که از معنی واژه بر می آيد مفهوم Real-time PCR مشاهده لحظه به لحظه يک فرايند می باشد. مشکلات و نواقص عديده موجود در End point PCR همراه با نياز به يک روش تعيين کمی دقيق زمينه گشايش عرصه ای نوين در تکنيک PCR گرديد.   فرمول بندی Real-Time PCR ابتداتوسط Higuchi و همكارانش به انجام رسيد. در اين سيستم تشخيصی يک ماده فلورسانت درطی واكنش متناسب با ميزان محصولات هر سيکل آزاد می شود وميزان فلورسنت آن توسط يک نمايانگر (Detector) شناسا يی و ثبت می گردد.

مزايای روش Real-time PCR:

1) تكثير در هر زمان قابل مشاهده می باشد. به عبارتی امكان مانيتورينگ لحظه به لحظه واكنش فراهم آمده و در هر سيكل امكان بررسی فرآيند تكثير وجود دارد.

2) امكان بهينه سازی واكنش بطوری كه مناسب ترين غلظت DNA و پرايمر و همچنين تعداد سيكل لازم برای تکثير  مشخص می شود.

3) امكان قطع واكنش در زمان دلخواه: از آنجايی كه روند PCR قابل مشاهده می باشد. درصورت عدم تكثير و يا رفتن به فاز سكون (Plateau) می توان به واكنش خاتمه داد و از اتلاف وقت و انرژی پرهيز نمود.

4) انجام PCR كمی : با استفاده از روش Absolute Quantification و Relative Quantification ميزان دقيق و نسبی الگوی اوليه قابل اندازه گيری است.

5) معمولا واكنش ها سريعتر اتفاق می افتد و زمان كمتری لازم است.

6) محدوده تشخيص آن (Detection Range) بالاتر از PCR معمولی است( حتی اختلاف كمتر از 2 برابر را هم نشان می دهد)